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QuickShuttle转染试剂应用实例‍

时间：2019-05-24 浏览：【打印此页】【关闭】

QuickShuttle转染试剂应用实例（一）

不同转染试剂对慢病毒包装及包装后
病毒感染豚鼠成纤维细胞效率的影响

【摘要】本文比较了磷酸钙、脂质体2000、脂质体LTX和QuickShuttle-293四种转染试剂对慢病毒载体的包装效率，以及包装后病毒感染细胞的能力。通过流式细胞仪和MTT法对包装效率和病毒的感染效率进行了检测。结果显示，QuickShuttle-293法转染后的转染效率、转染后细胞活力和包装后病毒对靶细胞的感染效率（分别达到95.5%、88.5%和93.3%）均显著高于其他三种转染试剂。

文章来源

何承文，何玉龙，吴月红，邵风慧

不同转染试剂对慢病毒包装及包装后病毒感染豚鼠成纤维细胞效率的影响

黑龙江畜牧兽医, 2015, 19: 34-38.

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病毒包装

293T细胞消化铺板（60mm培养皿），24hr后，吸出培养液，用PBS洗2次。将3种慢病毒载体包装质粒（合计11.2μg）与22.4μl的QuickShuttle-293分别稀释到100μl生理盐水中，合并后直接加入细胞培养基中，轻摇细胞板以混匀，移至37℃、5%CO2培养箱中培养。24hr后观察转染结果，并于24hr及48hr收集病毒液，-80℃保存。（图1）

图1 不同转染试剂转染293T细胞后荧光显微镜下GFP阳性细胞比较

流式细胞仪测定转染效率

将4组转染48hr后及对照293T细胞分别用0.25%胰蛋白酶消化，离心去上清，收集细胞，用PBS重悬，用流式细胞仪收集20000个细胞，将其中表达GFP的细胞数与细胞总数相比，即为转染效率。（图2）

图2 不同转染试剂转染293T细胞后GFP阳性细胞比例（流式细胞仪）

MTT法检测293T细胞转染后的活性

将4种试剂转染48hr后的293T细胞，用MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性，结果。（图3）

图3 MTT法检测不同转染试剂转染293T细胞后细胞的存活率

慢病毒载体对豚鼠成纤维细胞的感染

将上述收集的病毒液经0.45μm滤膜过滤，并加入终浓度为8μg/ml的聚凝胺，再加入生长至80%融合的豚鼠成纤维细胞中，12hr后换新鲜病毒液。重复感染2次。感染48hr后的细胞用胰酶消化，离心收集细胞，用PBS重悬，用流式细胞仪收集10000个细胞，将表达GFP的细胞与细胞总数相比，比值即为病毒感染效率。（图4、图5）

图4 不同转染试剂包装病毒感染豚鼠胎儿成纤维细胞后GFP阳性率统计

图5 不同转染试剂包装病毒感染豚鼠胎儿成纤维细胞能力的比较

附：QuickShuttle

QuickShuttle系列转染试剂是一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点，推荐用于常规哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。QuickShuttle 区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在贴壁细胞传代后尚未贴壁时立即进行转染（立传立转）；（2）转染操作可在一分钟内完成。因此特别适合用于快速大量瞬时转染表达目的蛋白，或大量制备各种病毒载体和假病毒。详情点击

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