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    Catalog_noBF03097-96T
    Product_nameBSA(牛血清白蛋白)检测试剂盒
    Size96T
    CategoryELISA检测试剂盒
    Price2800
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      1、 试剂盒简介
      此定量检测牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫试剂盒，采用抗BSA的单克隆配对抗体，分别作为包被抗体和检测抗体，组成双抗体夹心ELISA检测试剂盒，并与美国标准局的BSA标准品为参照标准，本试剂盒最低可检测到1ng/mL的BSA。
      2、 试剂盒组份：
      2.1抗BSA单克隆抗体包被的96孔板条：                       1块
      2.2 BSA标准品：32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、
      2ng/mL、1ng/mL、0ng/mL              各1瓶（0.4mL/瓶）
      2.3 BSA内部参比（20ng/mL）：                           1瓶（0.4mL/瓶）
      2.4 TMB底物显色液：                                1套（A和B各6.5mL）
      2.5显色底物终止液（2N，H2SO4）：                        1瓶（13mL）
      2.6样品稀释液                                            1瓶（13mL）
      2.7洗涤液（10倍浓缩）：                                  1瓶（50mL）
      2.8使用说明书：                                               1份
      2.9酶标记抗BSA抗体：                                   1瓶（0.13mL）
      2.10酶标记抗体稀释液：                                    1瓶（13mL）
      3、保存：
      本试剂盒应于2-8℃保存，有效期6个月。
      4、所需仪器：
      酶标仪（波长450nm），10μL、100μL、1mL移液器，300μl多道移液器，移液器吸头、37℃恒温水浴箱。
      5、操作步骤：
      5.1将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。
      5.2取出包被有抗BSA的96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔，50μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比，各两孔，50μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做1:100稀释，加入各反应孔，100μL/孔（酶标记抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在15分钟内完成。
      5.3置室温20~24℃避光反应1小时，用洗涤液洗涤四遍，拍干。
      5.4用移液器加TMB底物显色液100μL/孔，请勿震荡，室温20~24℃避光反应10分钟。
      5.5用移液器加终止液100μL/孔，稍微震荡5s混匀。
      5.6在酶标仪450nm波长处读数。
      6、注意事项：
      6.1如样品中BSA含量高于32ng/mL，可将样品做适当稀释。
      6.2样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。
      6.3反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。
      6.4洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。
      6.5开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置4℃密闭保存。
      6.6在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免被有BSA的环境和物品污染。
       
      7、结果判定：
      7.1实验有效参数：
      实验结果须满足以下有效参数为成立：
      0ng/mlOD值≤0.1； 32ng/mlOD值≥0.80； 阳性参考18~22ng/ml； R2≥0.98；
      7.2计算：
      在EXCEL里面以标准浓度为横坐标，消零OD值为纵坐标作散点图，添加趋势线，再显示曲线方程和R2值，将检测样品OD值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。

      标准浓度 OD1 OD2 OD3 平均值 消零OD
      0 0.069 0.062 0.064 0.065 0
      1 0.111 0.109 0.113 0.111 0.046
      2 0.13 0.127 0.131 0.129 0.064
      4 0.191 0.192 0.193 0.192 0.127
      8 0.332 0.319 0.327 0.326 0.261
      16 0.583 0.588 0.596 0.589 0.524
      32 1.039 1.025 1.054 1.039 0.974
       
      7.3判定：
      在标准曲线中，设OD0~16ng/mL为区间A；OD16~32ng/mL为区间B；大于OD32 ng/mL为区间C。
      7.3.1如测得的OD值小于标准曲线中2ng/mL对应OD值，则BSA含量测定结果计为小于2ng/mL。 
      7.3.2如不同稀释浓度的样本测得的OD值均位于区间A，则最终结果计算取其最低稀释度的测定值。
      7.3.3如不同稀释度的测定值均位于区间B或同时位于区间A和B或同时位于区间B和C，则取其最接近OD16ng/mL的测定值。
      7.3.4如不同稀释度测定值均位于区间C，则需将样本做进一步稀释测定，使其测定值居2~32ng/mL所对应的OD值区间，计算方法按上述7.3.2-4。
      7.3.5如高稀释度测得OD高于低稀释度或未稀释的样本OD，则可能是操作失误或样本中BSA含量过高（HOOK效应），需重试或调整稀释度。
      7.3.6最终结果要考虑稀释因素（实际BSA含量＝计算值X稀释倍数）。
      8、本试剂盒技术指标
       
      8.1检测限和定量限
      检测限：零浓度标准品加上两倍的标准差（20个零孔计算值），本试剂盒检测限计算为0.2ng/mL(ppb)。定量限为标准曲线检测下限，1 ng/mL。
       
      8.2准确度和精密度
      计算批内批间变异系数，在高中低三个浓度（20、10、5）下五个重复检测计算批内变异系数，不同时间重复三次计算批间变异系数，CV%均小于10%。
      批间 批内
      浓度(ng/ml) SD 回收率% CV% 浓度(ng/ml) SD 回收率% CV%
      20 0.06 107.3 5.6 20 0.047 102.6 4.6
      10 0.049 105.4 4.7 10 0.022 101.2 2.2
      5 0.059 99.66 5.9 5 0.028 97.6 2.9
       
      8.3交叉反应
      本试剂盒对人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，鱼明胶没有交叉反应，而对山羊血清有10%的交叉反应（以相同OD值时BSA和山羊血清的浓度的比值的百分数为准）。
      和BSA没有交叉反应的物质
      反应物质 反应浓度
      人血白蛋白 10mg/ml
      小鼠血清 10%
      兔血清 10%
      鱼明胶 1%
       
      8.4钩状效应
         当样品浓度远高于标准曲线最高浓度的时候，会产生HOOK效应，即反应OD值小于32ng/mL的BSA时候的浓度，本试剂盒为500μg/mL以上。
       
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